免疫層析工藝常見問題及解決方案

Q1：用候選抗體檢測賦值樣本時靈敏度低，cut off值區(qū)間測不到。

方案：

1.通過換用大粒徑標記物，增加標記抗體和包被抗體的用量；如果采用的是競爭法測抗原，可以抗原用來標記，抗體用來包被，用獨立質(zhì)控系統(tǒng)。
2. 抗體本身性能達不到要求，更換原料。

Q2：用候選抗體檢測樣本時高值樣本測不到怎么辦？

方案：

1.此項目臨床上測定區(qū)間多少，如果靈敏度較高可以考慮稀釋一定倍數(shù)再測定。
2.線性上不去很有可能是標記抗體和包被抗體的用量不合適，理論上用量不足，但實際應用時并不一定，建議對標記抗體和包被抗體設置梯度進行調(diào)試。
3.換用小粒徑的標記物，小粒徑的標記物比表面積大，結(jié)合的抗體量更多。
4.抗體親和性不佳，更換原料。

Q3：用候選抗體檢測已賦值的臨床樣本，相關性指標較差。

方案：

1.樣本來源及賦值數(shù)據(jù)是否可靠？樣本是否新鮮？有條件的話可以用對照試劑盒對樣本進行檢測，以確定樣本的實際數(shù)值是否發(fā)生改變。
2.樣本中存在干擾成分，需篩選合適的阻斷劑。

Q4：標記好的抗體，封閉完了放在儲存液里，一兩天后有沉淀。

膠體金或是熒光微球標記后的抗體時間久了出現(xiàn)輕微沉淀很正常，渦旋或是水浴超聲沉淀即可消失，如果出現(xiàn)結(jié)塊沉淀，超聲后仍無法去除，則可能存在以下問題：
1.標記體系中pH值不合適，導致在標記時就出現(xiàn)聚沉的現(xiàn)象，設置pH梯度進行調(diào)試
2.封閉劑的成分或是用量不合適，導致金顆?；蚴俏⑶虮砻嬗新懵段稽c，在儲存時出現(xiàn)交聯(lián)聚集；調(diào)整封閉劑用量或更換封閉劑（廠家、種類）再測試。
3.儲存液不合適，導致偶聯(lián)的復合物不穩(wěn)定出現(xiàn)解離，需重新配制儲存液。

Q5：為了提升試紙條檢測上限，T線提升了包被用量，為什么信號并沒有增加？

NC膜結(jié)合蛋白的量是有限的，超過上限后多余的蛋白沒有結(jié)合或結(jié)合的不牢固，甚至會造成蛋白的堆積，形成空間位阻效應，致使檢測時信號會不再增加甚至降低。在調(diào)整工藝時，需要根據(jù)測試結(jié)果選擇合適的包被用量。

Q6：陰性組用樣本稀釋液進行測試，T線出現(xiàn)假陽性是因為什么？

這種假陽是由于標記物和包被的蛋白非特異性結(jié)合造成的，項目中很常見，可從以下幾個方面解決：
1.在標記時更換封閉劑成分或是增加用量。
2.在不影響試劑靈敏度的情況下，降低標記和包被抗體用量，將整體信號壓下來，來消除這種本底信號。
3.增加離子濃度，或更換稀釋液，改用其他體系進行嘗試。