心肌肌鈣蛋白I（cTnI）的測(cè)定方法

心肌肌鈣蛋白I（cTnI）是心肌損傷的敏感性和特異性指標(biāo)，與其他檢測(cè)指標(biāo)相比，cTnI在血液中出現(xiàn)時(shí)間早、持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。cTnI作為一項(xiàng)理想的心肌損傷標(biāo)志物，對(duì)急性心肌梗死（AMI）、不穩(wěn)定型心絞痛（UAP）等疾病的預(yù)測(cè)診斷、病情檢測(cè)、療效觀察及預(yù)后評(píng)估都具有較高的臨床價(jià)值。測(cè)定血清cTnI水平的方法有多種，本文主要介紹當(dāng)下幾個(gè)比較重要的測(cè)定技術(shù)，并簡(jiǎn)要分析了其特點(diǎn)。

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定cTnI

酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）是一項(xiàng)被廣泛用于臨床的酶標(biāo)固相免疫測(cè)定技術(shù)。ELISA檢測(cè)cTnI主要方法是通過將待測(cè)血清與辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的特異性抗體混合并孵育，再向包被了cTnI的微孔板中加入已經(jīng)孵育好的混合液，由于微孔板之前包被的cTnI與待測(cè)樣品中的cTnI共同競(jìng)爭(zhēng)單抗，使得微孔板上的HRP被間接固定住，從而可通過測(cè)定被間接固定在微孔板中的HRP催化活性，與標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)照計(jì)算得到待測(cè)血清中cTnI的濃度。目前，ELISA方法檢測(cè)cTnI已經(jīng)成熟化，適合于批量檢測(cè)。但由于血清中cTnI的含量偏低，臨床檢測(cè)需快速，而ELISA步驟較為繁瑣，測(cè)定所需時(shí)間偏長(zhǎng)，且靈敏度相對(duì)偏低，因而此法在cTnI檢測(cè)中的應(yīng)用受到一定限制。

膠體金法測(cè)定cTnI

膠體金免疫層析技術(shù)主要通過雙抗體夾心法原理定性檢測(cè)人血清/血漿中的cTnI。在試劑卡中的纖維膜上質(zhì)控線（C線）包被有羊抗鼠IgG，檢測(cè)線（T線）包被有抗cTnI單克隆抗體-2，另一端包被有抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復(fù)合物。檢測(cè)時(shí)，待測(cè)血清/血漿樣品首先與抗cTnI單克隆抗-1-膠體金混合，并沿纖維膜向上層析依次通過T線、C線（C線必須顯色，否則結(jié)果無效）。如果血清/血漿中有cTnI存在，cTnI首先和抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金結(jié)合，形成“cTnI-抗cTnI單克隆抗體-1-膠體金復(fù)合物”，在層析至T線時(shí)，會(huì)被預(yù)先包被在T線的另一抗cTnI單克隆抗體-2捕獲。結(jié)果顯示在T線和C線處均出現(xiàn)一條紅色線條，為陽(yáng)性，表示樣品中有超出檢出靈敏度的cTnI存在，提示病人發(fā)生了心肌梗塞；若在T線處未形成線條，為陰性，表示樣品中無cTnI存在或cTnI濃度低于檢出靈敏度。膠體金法樣本用量少，簡(jiǎn)便快捷，可快速獲得診斷結(jié)果，其局限性在于結(jié)果只能初步定性分析，不能進(jìn)一步定量分析。

化學(xué)發(fā)光法測(cè)定cTnI

化學(xué)發(fā)光法測(cè)定cTnI主要分為兩類。一類是較為普遍應(yīng)用的測(cè)定系統(tǒng)采用直接化學(xué)發(fā)光法，通過小分子化學(xué)發(fā)光劑吖啶酯直接標(biāo)記抗原或抗體，反應(yīng)洗滌后，在堿性條件下檢測(cè)其發(fā)光強(qiáng)度，從而檢測(cè)cTnI。另一類測(cè)定cTnI的化學(xué)發(fā)光系統(tǒng)多采用酶促化學(xué)發(fā)光雙抗體一步夾心酶免疫分析法，以ALP作為標(biāo)記物，用單克隆抗cTnI IgG抗體包被的磁性微粒為固相載體，檢測(cè)時(shí)樣品中的cTnI與包被在固相載體上的抗體及ALP標(biāo)記的抗體形成夾心復(fù)合物，加入發(fā)光基質(zhì)底物，測(cè)定其發(fā)光強(qiáng)度，通過多點(diǎn)標(biāo)定曲線計(jì)算cTnI濃度?；瘜W(xué)發(fā)光法不僅安全、靈敏，而且通用性強(qiáng)，但儀器成本相對(duì)ELISA法而言較高。

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定cTnI

膠乳增強(qiáng)免疫比濁法測(cè)定cTnI是通過將cTnI與包被有特異性抗體的致敏膠乳顆粒結(jié)合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯(lián)，測(cè)定一定波長(zhǎng)下溶液濁度增加的程度與標(biāo)本中cTnI含量關(guān)系。該測(cè)定方法不僅特異性強(qiáng)，靈敏度高，重復(fù)性好，線性范圍寬，而且操作簡(jiǎn)便、快速，具有一定的臨床應(yīng)用價(jià)值。有研究者比較了3種cTnI試劑在自動(dòng)生化分析儀分析后的性能參數(shù)，結(jié)果顯示膠乳增強(qiáng)免疫比濁測(cè)定cTnI具有較高的精密度和靈敏度，與化學(xué)發(fā)光免疫分析具有良好的相關(guān)性。

cTnI作為心肌損傷的一項(xiàng)特異性指標(biāo)，已被廣泛應(yīng)用于臨床診斷、風(fēng)險(xiǎn)分層以及療效觀察等方面。有關(guān)cTnI的檢測(cè)方法也在不斷更新，除以上介紹的四種方法外，還有熒光分析法、質(zhì)譜分析法、生物傳感器法等等。在測(cè)定方法日趨完善的同時(shí)，廣大研究者更需致力于cTnI測(cè)定標(biāo)準(zhǔn)化問題。

參考文獻(xiàn)

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