血清淀粉樣蛋白A（SAA）抗體的制備

SAA是一種急性時相蛋白，當炎癥或感染急性期在體內(nèi)含量迅速升高，當感染得到控制后又會迅速恢復(fù)至正常水平，是常見的炎癥標志物。對體內(nèi)SAA水平進行檢測對于細菌及病毒感染的診斷具有重要的指導(dǎo)意義。

SAA抗體是SAA檢測試劑盒的核心原料，目前SAA抗體的制備可以分為利用雜交瘤技術(shù)制備和利用基因工程制備兩大類，兩種生產(chǎn)方式在制備周期、實驗難度、抗體產(chǎn)量等方面有所區(qū)別，本文就SAA抗體的制備相關(guān)知識點做一個介紹。

雜交瘤技術(shù)制備SAA抗體

雜交瘤技術(shù)是目前主流的SAA抗體制備方式，利用SAA抗原蛋白免疫宿主（通常為Balb/c小鼠），對宿主進行4-5次免疫后取其脾細胞與骨髓瘤細胞融合得到雜交瘤細胞。再對雜交瘤細胞進行陽性克隆篩選及單克隆篩選得到雜交瘤細胞單克隆。得到雜交瘤單克隆細胞株后，對細胞株進行培養(yǎng)（可以將單克隆細胞株注入小鼠腹水進行體內(nèi)培養(yǎng)，也可以利用培養(yǎng)瓶進行體外培養(yǎng)）即可得到鼠源SAA單克隆抗體。

對于免疫熒光、膠體金、膠乳比濁等免疫檢測平臺，僅僅有一株SAA抗體是不夠的，至少需要一對能夠同時與SAA蛋白結(jié)合的配對抗體才能夠完成對SAA蛋白的檢測。因此，需要篩選得到多株單克隆雜交瘤細胞株并制備得到多種不同的SAA單抗，利用雙抗夾心ELISA的方式進行配對抗體的篩選。

基因工程技術(shù)制備SAA抗體

利用雜交瘤技術(shù)制備SAA存在雜交瘤細胞退化及批次產(chǎn)量少等問題，利用基因工程技術(shù)可以很好的解決這些問題。

體外重組技術(shù)制備重組SAA抗體首先需要獲得SAA的抗體序列（通過對雜交瘤細胞進行測序即可獲得SAA抗體序列），抗體序列合成基因并將基因?qū)氲捷d體之中構(gòu)建表達質(zhì)粒，將構(gòu)建好的質(zhì)粒轉(zhuǎn)入到合適的表達系統(tǒng)中（通常為哺乳動物細胞表達系統(tǒng)）進行重組表達，最后通過protein A/G純化得到重組SAA單抗。

與雜交瘤細胞相比基因序列是可以永久保存的，不用擔心因雜交瘤細胞退化而導(dǎo)致無法生產(chǎn)抗體的問題。

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)

哺乳動物細胞表達系統(tǒng)分為瞬時轉(zhuǎn)染和穩(wěn)定細胞系構(gòu)建兩種制備方式。瞬時轉(zhuǎn)染能夠快速的表達得到SAA抗體，但是產(chǎn)量較低。穩(wěn)定細胞系構(gòu)建的實驗周期比瞬時轉(zhuǎn)染長，實驗難度也較大，但是利用穩(wěn)定細胞系構(gòu)建技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)SAA抗體的長期、穩(wěn)定、大量的生產(chǎn)。

如果SAA抗體的需求量很大，利用瞬轉(zhuǎn)技術(shù)需要進行多個批次的制備才能夠滿足需求，此時會存在批間差的問題，但是利用穩(wěn)定細胞系構(gòu)建則能很好的滿足客戶的需求（可一次性生產(chǎn)克級至百克級SAA抗體）。

雜交瘤技術(shù)與基因工程技術(shù)對比

相關(guān)產(chǎn)品

相關(guān)閱讀